Образ Троицы происходит из Троицкой церкви села Дивная Гора Ярославской области. Он следует иконографии, созданной Андреем Рублёвым для знаменитой иконы Троицкого собора Троице-Сергиевой лавры. Датировка рублёвской иконы колеблется между 1408 и 1425 годами.

Литературной основой этого сюжета послужил текст Ветхого Завета, повествующий о встрече праотца Авраама с Богом в виде трех мужей. Они предрекли Аврааму рождение сына (Быт. 18, 1-15). В христианской традиции этот текст понимается как описание явления Триипостасного Божества (Бога Отца, Бога Сына и Бога Святого Духа) в виде трех ангелов, еще до Боговоплощения.

Все элементы композиции имеют не только буквальное, но и символическое прочтение. Например, палаты отсылают к образу шатра как жилища и одновременно указывают на Божественное Домостроительство — план, по которому строился мир от самого начала Сотворения, со всеми живыми существами, людьми, их грехопадением и искуплением. Красная занавесь символизирует завесу Иерусалимского храма — прообраз плоти Христовой: ее ткала Богородица в момент Благовещения, и в момент Распятия завеса в Иерусалимском храме разорвалась надвое снизу доверху. Мамврийский дуб интерпретируется как Древо жизни и одновременно Крестное древо. Гора символизирует горний мир, к которому, благодаря искупительной жертве Христа, люди получили надежду вернуться.

Сцены «Гостеприимства Авраама» были известны уже в раннехристианском искусстве, встречались в росписях катакомб, декоре саркофагов и богослужебных предметов. С VI–VII веков эта сцена воспроизводится в храмовой декорации, в том числе в мозаиках церквей-мартириев, например, в Сан-Витале в Равенне. К XIV веку близкий рублёвской Святой Троице вариант установленного канона «Гостеприимства Авраама» стал часто использоваться для украшения створчатых панагий, путевых дарохранительниц.

Андрей Рублёв отказался от изображения подносящих яства праотцев, оставив лишь образ трех ангелов за трапезой. В представленной композиции сохранены основные иконографические элементы рублевского образца — округлые очертания ангельских фигур, склоняющихся над столом и друг к другу, а также контур стола. В отличие от иконы Рублёва, изображения в верхней части доски: палаты, древо и гора с трехчастным «гребнем» — имеют вытянутые пропорции. Возможно, это изменение было обусловлено размерами иконостаса, для которого предназначалась икона.