Работа над пьесой шла в Ялте и Гурзуфе летом и осенью 1900 года. В конце октября Чехов передал «Три сестры» в театр, режиссёрам Константину Станиславскому и Владимиру Немировичу-Данченко. Премьера спектакля состоялась в Москве 31 января 1901 года. Сам Чехов в это время находился в Ницце на отдыхе и подробности узнавал из писем и газет. Книппер сообщала: «По всей Москве только и разговору, что „Три сестры“. Одним словом, успех Чехова и успех нашего театра». Роль Маши стала одной из самых значительных в репертуаре актрисы. Слева в рамке на стенде — копия уникальной афиши первого представления пьесы «Три сестры» в МХТ (тогда он назывался Московский Художественно-общедоступный театр). Из афиши можно узнать, что все билеты на премьеру были проданы заранее.

На первом представлении роли между артистами распределились следующим образом: Маша — Ольга Книппер, Ольга — Мария Савицкая, Ирина — Мария Андреева, Чебутыкин — Александр Артём, Вершинин — Константин Станиславский, Андрей — Владимир Лужский, Кулыгин — Александр Вишневский, Тузенбах — Всеволод Мейерхольд, Наташа — Мария Лилина.

Мало кому известно, что роль Тузенбаха была специально написана Чеховым для Всеволода Мейерхольда. Писатель относился к молодому артисту с глубокой симпатией. В апреле 1900 года Чехов поселил Мейерхольда в своем ялтинском доме на время гастролей МХТ. Впоследствии до конца своей жизни он переписывался с актером и следил за его творческой судьбой. Мейерхольд стал первым исполнителем двух чеховских ролей в МХТ: Треплева («Чайка») и Тузенбаха («Три сестры»). Вторая роль, к сожалению, оказалась последней ролью Мейерхольда в МХТ: он покинул Художественный театр из-за принципиальных разногласий со Станиславским. Роль Тузенбаха в дальнейшем исполнял Василий Качалов. На стенде можно познакомиться с фотографиями артистов МХТ, участников московской премьеры «Трёх сестёр» 1901 года.